Evaluación del efecto de Paclitaxel (Taxol ®) en el modelo de membrana corionalantoidea (MCA) de embrión de pollo bajo diferentes condiciones experimentales

Abstract

La membrana corioalantoidea (MCA) del embrión de pollo es rica en vascularización, comúnmente utilizada como modelo experimental in vivo. Paclitaxel (Taxol ®), es inhibidor microtubular, bloquea/ prolonga la fase G2/M. El objetivo del presente trabajo fue analizar los cambios inducidos por Paclitaxel en la arquitectura de la MCA en diferentes condiciones experimentales. Para ello se incubaron huevos de pollo a 37°C y 60% de humedad, a los 8 días del desarrollo se les realizó una ventana sobre la cáscara de 1,5 cm y se inyectó solución fisiológica (SF) y solución etanólica (SE) como control y diferentes diluciones de Paclitaxel. Posteriormente para su estudio in vitro, se procedió a la extracción y cultivo de explantos de la MCA. Pasada las 48 hs posterior a la adhesión de los explantos, se procedió a realizar por triplicado: (1) control SF. (2) control SE al 0,05%;(3) dosis de Paclitaxel preparada al 2 nM (4) al 4 nM (5) al 1 μM. Pasadas las 12 y 18hs se procedió a la toma de imágenes de la MCA y fijación en formol a 10%. Las imágenes fueron capturadas utilizando microspio invertido. Al evaluar los resultados se observó in ovo que la dosis 2 nM no resultó citotóxica, permitiendo observar una morfología de vasos sanguíneos y viabilidad del embrión semejante al de los controles, a partir de 4 nM se pudieron observar cambios en la arquitectura vascular, el embrión se encontraba vivo y se evidenciaron petequias en los vasos sanguíneos, a la dosis 1mM se evidenció al embrión vivo, con escaso movimiento y cambios en la arquitectura de los vasos sanguíneos. In vitro se pudo observar que los controles no presentaron cambios en la arquitectura de la MCA, a la dosis 2nM se evidenció tanto a las 12 hs como a las 18 hs resultados similares al de las muestras control, en la dosis 4 nM se observaron cambios en la arquitectura vascular en ambos tiempos de tratamientos con la dosis 1mM se evidenció citotoxicidad, con desorganicacion celular y perdida de adhesión del explanto. Por lo cual al comparar los cinco grupos de muestras (dos grupos de control y tres de tratamiento), los datos experimentales mostraron que el farmaco fue mejor tolerado sin ninguna modificación inducida en el proceso angiogénico normal a la dosis de 2 nM En comparación con la dosis 4 nM se observaron cambios morfológicos en los vasos de la MCA, y finalmente la desorganización de la MCA a 1 mM infiriendo una citoxicidad en la arquitectura y funcionalidad vascular, asociado a su posible rol antiangiogénico.