Control químico de la contaminación en brotes in vitro de Eucalyptus nitens mediante el uso de biocidas en biorreactores de inmersión temporal

Abstract

Eucalyptus nitens no ha sido masificado aún debido a su escasa producción de semillas, alto grado de infertilidad e hibridación; además de su carácter recalcitrante que dificulta la multiplicación vegetativa por métodos convencionales. Una solución a esta problemática es la implementación de las técnicas de cultivo in vitro, con el fin de obtener material uniforme y en tiempos reducidos. Los patógenos endógenos difíciles de detectar tempranamente, escapan a los efectos de la esterilización superficial de los explantes y se manifiestan luego del subcultivo, durante la fase de multiplicación. El propósito de este trabajo fue desarrollar un procedimiento que permita el establecimiento in vitro exitoso de segmentos nodales de E. nitens en un sistema de inmersión temporal, mediante el control químico de contaminantes con un biocida comercial del grupo de las isotiazolonas. Se trabajó con segmentos caulinares obtenidos a partir de regeneración in vitro con contaminación visible de bacilos Gram negativos (previamente caracterizados). Los explantes fueron subcultivados a biorreactores de inmersión temporal automatizados conteniendo un medio basal Murashige y Skoog (1962) líquido. Se evaluó la adición al medio del biocida en distintas concentraciones con y sin buffer para mantener el pH del medio de cultivo. La eficiencia de los tratamientos se evaluó a través de porcentaje de cultivos sin contaminación visible; fitotoxicidad del biocida y algunos parámetros de crecimiento como brotación y elongación de vástagos. Los tratamientos controles, sin biocida aunque con la adición del buffer, presentaron el 100% de contaminación mientras que la adición al medio del biocida ha demostrado ser muy efectivo en el control de los contaminantes, sin presentar síntomas de fitotoxicidad y además registrando el mayor número de hojas por brote (14,22±4,49) y una mayor longitud promedio de vástagos (1,61±0,65). Por ello se recomienda para lograr el establecimiento de segmentos nodales de E. nitens libre de contaminación, adicionar al medio de cultivo 0,11% de biocida + 20 mM de buffer, dado que esta combinación ha demostrado ser inocua al no comprometer el crecimiento normal de los explantes y ser eficiente controlando los patógenos endógenos.