Análisis morfológico de astrocitos expuestos al extracto de Ipomoea carnea y swainsonina

Abstract

Astragalus, Swainsona, Oxitropis, Ipom oea y Sida son plantas tóxicas que producen una enfermedad de almacenamiento lisosomal (EAL) de origen adquirido en animales. Todas estas plantas contienen el mismo principio tóxico denominado Swainsonina (SW). Ademas, I. carnea contiene otros alcaloides llamados calisteginas. Si bien, estudios previos han demostrado la presencia de vacuolización en células de cultivo primario de la glia expuestas al extracto de I. carnea, un estudio sobre los cambios morfológicos a través de un análisis de imágenes no ha sido comunicado. El objetivo del presente trabajo fue analizar las alteraciones morfológicas inducidas por el alcaloide SW y por el extracto de I. carnea con una concentración de SW de1,6 gg/mg sobre las células tumorales de la glía. Para ello, se empleó la línea celular C6 de glioma murino (ATCC:CCL-107TM). Las células se sembraron en placas de 96 pocillos (1.5-2.5 x 104/pocillo) con Dulbecco's Modified Eagle's Medium y suero fetal bovino (DMEM-SFB 10%). Al alcanzar la monocapa un 80% de confluencia, se adicionaron diferentes concentraciones del extracto de I. carnea (100­ 300 gM de SW) y SW (1000-3000 gM). Luego de 48 h de incubación a 37°C y 5% CO2, las alteraciones morfológicas fueron evaluadas a partir de la tinción de Rosenfeld y el análisis morfométrico a partir de la inmunocitoquímica, empleando el anticuerpo GFAP. Se evaluaron los astrocitos positivos para GFAP a partir de 10 imágenes, las longitudes de los procesos se definieron como la extensión desde el punto en que el proceso emergía del cuerpo celular hasta la punta del proceso mayor. El número y las longitudes de los procesos se midieron a partir de 25-30 células. Para ello se empleó el programa Image J. Se evidenciaron vacuolas citoplasmáticas en las células C6 a partir de 150 gM del extracto de I. carnea y 1000 gM de SW. En estas mismas concentraciones se observó un incremento de la longitud de las prolongaciones (más de 100gm) en comparación con los controles que no superaban los 50gm. Asimismo, se visualizó aumento del número de las ramificaciones, observándose más de 3 prolongaciones por cuerpo celular, a diferencia del control donde no superaban más de 2 prolongaciones. Estos resultados indicarían, a las dosis evaluadas, reactivación celular con presencia de autofagia caracterizada por degeneración vacuolar. Sin embargo, las diferencias en las concentraciones empleadas entre el extracto y SW podrían justificarse debido a la presencia de otros componentes en I. carnea como las calisteginas.