Tinciones especiales para la observación y reconocimiento de estructuras celulares bacterianas

Abstract

En el laboratorio de microbiología, las tinciones de bacterias y sus estructuras, son muy importantes para lograr una correcta identificación. Las tinciones especiales son utilizadas para colorear e identificar partes específicas de microorganismos como endosporas, flagelos, gránulos y cápsulas. Las endosporas poseen cubiertas exclusivas que las hacen resistentes a los factores ambientales adversos, su posición y morfología en el interior de la bacteria constituyen un carácter taxonómico útil para diferenciar especies dentro de un mismo género. Estas estructuras hacen que las esporas aparezcan en el microscopio óptico como refringentes. A su vez la cápsula es un material mucoide, de tamaño variable y ambas estructuras presentan dificultad para ser coloreadas con las tinciones habituales. El objetivo del presente trabajo fue comparar dos técnicas diferentes de tinción de esporas y observar la disposición de las mismas en las células vegetativas e identificar las cápsulas bacterianas a través de la tinción de Hiss y Duguid. Para observar los esporos se utilizó una cepa de Bacillus cereus con dos técnicas, para la tinción de Würtz, se virtió en el preparado una solución de verde de malaquita sometiéndola a calor durante diez minutos, luego se lavó con abundante agua y se cubrió con solución de safranina quince segundos. En la tinción de Dorner, a una suspensión de gérmenes en agua destilada se le agregó iguales cantidades de fucsina fenicada y posteriormente se colocó en Baño María, diez minutos; sobre un portaobjeto se realizó un extendido con este material y solución acuosa de nigrosina al 5%. Se utilizó una cepa de Klebsiella sp. para visualización de cápsula, empleándose dos técnicas distintas, para la coloración de Hiss se cubrió el preparado con solución de violeta de genciana calentando hasta la emisión de vapores y se lavó con solución acuosa de sulfato de cobre. En el método de Duguid se colocan una gota de agua, una de tinta china y una ansada del cultivo se homogenizaron y cubrieron con cubreobjetos. Todos los preparados fueron observados con microscopio óptico y objetivo de inmersión. Las esporas se visualizaron en la tinción de Würtz de color verde y las células vegetativas de color rojo, mientras que en la coloración de Dorner los esporos se destacaron rojos sobre las bacterias grises. Las cápsulas se observaron como un halo celeste rodeando la célula roja en la tinción de Hiss y en la de Duguid delimitando una zona brillante alrededor de la bacteria en un campo oscuro. Se concluyó que los resultados obtenidos para la tinción de cápsulas en ambas técnicas (Hiss y Duguid) fueron satisfactorias. Por otra parte en la coloración de esporos los mejores resultados se obtuvieron con la técnica de Dorner debido a que en la coloración de Würtz el verde de malaquita no se fija al preparado o precipita formando cristales.