Liofilización de eritrocitos con anaplasma centrale e infección experimental

Abstract

La Anaplasmosis de los bovinos es una enfermedad infecciosa, transmisible, producida por una rickettsia, Anaplasma marginale. La profilaxis de la misma implica el uso de una vacuna trivalente que contiene Anaplasma centrale, obtenida de bovinos esplenectomizados. El objetivo del presente trabajo fue instaurar la infección experimental de A. centrale y liofilizar eritrocitos altamente infectados con este agente, para su estudio como potencial inmunogeno. Con este fin, fueron utilizados bovinos esplenectomizados n=2, ratones de la cepa CF1(n=4) y de la cepa Balb/c (n=4). El inoculo se obtuvo a partir de bovinos infectados crónicamente, la sangre se extrajo con citrato de sodio al 3.8%. La cantidad inoculada en los bovinos fue de 5x108 eritrocitos infectados con A. centrale (EIA) por vía endovenosa, 1x107 EIA en los ratones de ambas cepas administrados por vía intraperitoneal. Para la infección experimental en cobayos esplenectomizados, n=2 animales se inocularon 1x108 EIA, por la misma vía. Se tomaron muestras de sangre periférica de cada uno de los animales en los días 0, 15, 30, 45 y 60, para determinar el número de eritrocitos infectados por campo, evidenciados en extendidos sanguíneos. Asimismo, las muestras de sangre de todos los animales de experimentación fueron enviadas al laboratorio de Biotecnología de INTA- Castelar para la extracción de ADN y detección de A. centrale por PCR anidada de punto final. De las diferentes soluciones criopreservadoras, la de PVP fue la más adecuada para la liofilización de los eritrocitos. La infección experimental en bovinos arrojo un periodo de prepatencia de 12±1 dias y la ricketsemia duplico diariamente. La infección en ratones Balb/c y cobayos es posible. Sin embargo, el periodo de prepatencia fue prolongado y no se evidencio un comportamiento similar a la infección en el bovino. Son necesarios estudios posteriores para determinar la capacidad inmunoprofiláctica de eritrocitos infectados con A. centrale liofilizados obtenidos en el presente estudio.