Rabbit IgG antibodies against phospholipase A2 from crotalus durissus terrificus neutralize the lethal activity of the venom

Abstract

Crotalus durissus terrificus (C.d.t.) (South American rattlesnake) venom possesses myotoxic and neurotoxic activities, both of which are also expressed by crotoxin, the principal toxin of this venom. Crotoxin contains a basic phospholipase A2 (PLA2) and a non toxic acidic protein, crotapotin. We have produced and investigated the ability of IgG antibodies raised in rabbits against PLA2 to neutralize the lethality of the whole venom. PLA2 was isolated by gel filtration chromatography (Sephadex G-75). Specific antibodies were obtained by subcutaneous and intramuscular inoculation of PLA2

(700 μg) with Freund adjuvant. Groups of six mice (20 + 2 g) were inoculated with 0.5 ml i.p. of C. d. t. venom (4 μg) or a mixture of venom that had been preincubated with the desired volume of IgG antibodies. Mortality, recorded 24 and 48 h after inoculation, showed that IgG anti-PLA2 were more effective than anticrotalic serum in neutralizing the lethal activity. These results demonstrate that it could be possible to obtain an anti-venom made by specific antibodies with a high level of protection against the lethal component of C.d.t. venom, and/or the inclusion of these antibodies as a supplement in heterologous anti-venoms.

Los anticuerpos IgG de conejos anti-fosfolipasa A2

de Crotalus durissus terrificus neutralizan la actividad letal del veneno. El veneno de Crotalus durissus terrificus (C.d.t.) (Cascabel de Sud

América) posee actividad miotóxica y neurotóxica, actividades que también exhibe el complejo crotoxina, princi- pal componente tóxico de este veneno. El complejo crotoxina está constituido por una fosfolipasa A2 básica

(PLA2 ) y una proteína acídica no tóxica, el crotapotín. En este trabajo se estudió la capacidad neutralizante de anticuerpos IgG anti-PLA2 sobre la letalidad inducida por el veneno entero. El antígeno PLA2, fue aislado por

cromatografía de filtración en gel (Sephadex G-75). Se inocularon conejos machos por vía subcutánea e intra- muscular, con 700 μg de PLA2 y adyuvante para la obtención de anticuerpos específicos. La capacidad neutra- lizante del antisuero se analizó en ratones por inoculación con diluciones de veneno entero preincubado con un

volumen adecuado de anticuerpos IgG anti-PLA2. Se inocularion ratones controles con 0.5 ml i.p. de veneno (4 μg.ml-1). El número de muertes fue contabilizado a las 24 y 48 h posteriores a la inoculación, demostrándose que la capacidad neutralizante de los anticuerpos IgG anti-PLA2

fue superior a la obtenida con el antiveneno crotálico. Los resultados obtenidos demuestran la potencial aplicación de antivenenos constituidos por anticuerpos específicos contra PLA2, y/o la inclusión de estos anticuerpos como suplementos en antivenenos polivalentes.