Aislamiento de trypanosoma theileri en bovinos

Abstract

Con el objeto de realizar ensayos para la selección de bovinos y descartar en éstos la presencia de hemoparásitos (Babesia spp., Anaplasma spp. y Trypanosoma spp.), se enviaron n=5 muestras de sangre de bovinos procedentes de Monte Caseros, Corrientes, para la detección de estos agentes por técnicas de PCR. Simultáneamente se realizó la inoculación de sangre de los bovinos antes mencionados a 15 ratones, hembras de 3 meses de edad, cepa Balb/C, para la identificación de Trypanosoma spp. Los animales de experimentación, fueron pesados y distribuidos en 5 grupos homogéneos y las inoculaciones se realizaron vía intraperitoneal con 0,5 mi de inoculo, previa inmunosupresión utilizando Ciclofosfamida (200mg/kg, vía intraperitoneal). Posteriormente, se realizó el seguimiento de la infección experimental mediante firotis y técnica de Buffycoat a partir de microhematocritos, cada 3 días, por el lapso de 1 mes. Las necropsias se realizaron a los días 30 y 60 post inoculación, seleccionándose, en ambos casos, un ratón al azar de cada grupo. Los resultados de la PCR de un solo paso del gen msplb y de la familia génica vesla, revelaron la ausencia de Anaplasma spp. Y Babesia spp., respectivamente. La PCR anidada basada en el gen 18S rRNA, confirmó la presencia de un animal positivo a Trypanosoma spp. Posteriormente, se realizó una segunda amplificación, para descartar falsos negativos y arrojo un segundo animal positivo. La purificación y secuenciación en ambos sentidos determino que se trató de T. theileri. Durante los 30 días de seguimiento no se observaron hemoparásitos en sangre periférica de los ratones inoculados. La necropsia de los 30 días no reveló particularidades macro ni microscópicas, determinadas por observación histopatológica. A los 60 días se observó, en los ratones inoculados con las muestras de sangre positivas, dificultades para la locomoción y alimentación, marcada desnutrición, hipertrofia ganglionar, hepato y esplenomegalia, así como petequias en ambos órganos. Del análisis histopatológico de hígado y bazo se determinó anisocitosis hepática, células de Kupffer hipertróficas e hiperplásicas, focos circunscriptos de células inflamatorias, sinusoides hepáticos dilatados, espacios porta desorganizados, focos hemorrágicos, desorden celular a nivel de corteza esplénica y numerosos nidos de amastigotes en todo el hígado y bazo, entre otras alteraciones. A partir de este trabajo se encontraron 2 animales positivos a T. theileri y, si bien este hemoparásito es poco patógeno para el bovino, su presencia podría interferir en el desarrollo de los cultivos in vitro de Babesia spp., razón por la cual fueron descartados. Teniendo en cuenta estos resultados, se concluye sobre la importancia del diagnóstico de las enfermedades hemoparasitarias, así como la necesidad de desarrollar de un kit de diagnóstico serológico para las especies de Trypanosomas que afectan a los bovinos.