Diseño y estandarización de la técnica de PCR para Porphyromonas gingivalis

Abstract

El objetivo del presente trabajo fue diseñar y estandarizar la técnica de PCR para detección en líquido gingival de Porphyromonas gingivalis, en pacientes con enfermedad periodontal. Material y métodos: Se utilizaron iniciadores específicos para el gen ARNr 16s de Porphyromonas gingivalis. La especificidad de los iniciadores se ensayó utilizando material genético extraído de la cepa de referencia Porphyromonas gingivalis ATCC 33277. Se ajustaron las condiciones de amplificación y concentraciones de la mezcla de reacción. Para validar la técnica se aplicó a diez muestras clínicas de líquido gingival de pacientes con enfermedad periodontal. Resultados: Se vizualizaron bandas nítidas a 197pb utilizando cebadores específicos en seis muestras clínicas, y se obtuvo sensibilidad hasta 15 ug/ml de ADN purificado de la cepa de referencia ATCC 33277.Conclusiones: Se validó y estandarizó una PCR sencilla para la detección de Porphyromonas gingivalis en líquido gingival

O objectivo deste estudo era conceber e padronizar a técnica de PCR para a detecção de fluido gengival Porphyromonas gingivalis em doentes com doença periodontal. foram utilizados iniciadores específicos para o gene de rRNA 16S de Porphyromonas gingivalis: Material e métodos. A especificidade dos iniciadores foi testada utilizando extraído a partir da estirpe de referência condições de amplificação do material genético ATCC 33277. Porphyromonas gingivalis e concentrações da mistura reaccional foi ajustado. Para validar a técnica foi aplicada para dez amostras clínicas de fluido gengival de pacientes com doença periodontal. Resultados: bandas nítidas são vizualizaron de 197pb utilizando iniciadores específicos em seis amostras clínicas e de sensibilidade foi obtida até 15 ug / ml de ADN purificado a partir da estirpe de referência ATCC 33277.Conclusiones: foi validado e estandardizado simples PCR para a detecção de Porphyromonas gingivalis em fluido gengival.

The aim of the present work was to design and standardize the PCR technique for the detection of Porphyromonas gingivalis in gingival fluid in patients with periodontal disease. Material and methods: Specific primers were used for the Porphyromonas gingivalis 16s rRNA gene. The specificity of the primers was assayed using genetic material extracted from the reference strain Porphyromonas gingivalis ATCC 33277. The amplification conditions and concentrations of the reaction mixture were adjusted. To validate the technique was applied to 10 clinical samples of gingival fluid of patients with periodontal disease. Results: Clear bands were visualized at 197bp using specific primers in 6 clinical samples, and sensitivity was obtained sensitivity up to 15ug / ml purified DNA from the reference strain ATCC 33277. Conclusions: A single PCR was validated and standardized for the detection of Porphyromonas Gingivalis in gingival fluid.