Utilización de técnicas moleculares para la identificación de alimentos de diferentes orígenes

Abstract

Para establecer la autenticidad de un alimento es necesario demostrar que éste se comercializa bajo la denominación a la que realmente corresponde, así como que contiene las materias primas y los porcentajes de ingredientes que se declaran en el etiquetado. Los métodos más empleados para la identificación de especies animales se basan principalmente en el análisis de proteínas; sin embargo, estas metodologías tienden a ser desplazadas actualmente por el estudio de ácido desoxirribonucleico (ADN) nuclear o mitocondrial, lo que permite determinar de manera más exacta el origen y la identificación de todos los productos que llegan al consumidor, aunque ya estén procesados. Con el objeto de contribuir a solucionar situaciones problemáticas de este tipo, se puso en marcha en el Servicio Veterinario de Biología molecular (SVBM ), la optimización de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para la amplificación de un fragmento de ADN mitocondrial específico de diferentes especies entre las que se encuentra la especie canina. Se extrajo ADN de la especie canina, a partir de muestras de sangre y se realizó la puesta a punto de la PCR-Dog, en un volumen final de 25ql, conteniendo: 1X de Buffer de PCR, 2,5mM MgCl2; 0,4qM de cada Primer (Dog1, Dog2); 0,25mM de una mezcla equimolecular de dNTPs y 1U de Taq ADN polimerasa. En todos los casos se utilizaron 2ql de ADN e igual volumen de agua para el control negativo de amplificación. Las mezclas se sometieron a las siguientes condiciones térmicas de amplificación: desnaturalización inicial a 94°C durante 5 min, seguida de 30 ciclos de desnaturalización a 94°C durante 4 5 ", pegado de primers a 58°C durante 4 5 ", extensión a 72°C durante 9 0 " y extensión final a 72°C durante 5 min, finalizando con incubación a 4°. Los resultados fueron analizados sometiendo los productos a electroforesis en geles de agarosa 1%, teñidos con bromuro de etidio y visualizados por transiluminación UV y todas las muestras reflejaron uniformemente un producto de amplificación de 322pb correspondiente al amplicón previsto. Luego se realizó un control de especificidad aplicando la PCR-Dog en las condiciones descriptas con ADN de diferentes especies de animales (Vaca, Búfalo, Cabra, Oveja, Equino, Porcino, Ave y Rata) amplificando únicamente la muestra de ADN de canino.