Sensibilidad in vitro de Malassezia furfur y Malassezia sympodialis frente a antifúngicos de uso clínico

Abstract

Las especies de Malassezia son miembros de la micobiota cutánea normal del hombre y otros animales de sangre caliente. Se caracterizan por ser lipofílicas y la mayoría son lipo-dependientes debido a un defecto para sintetizar ácidos grasos. Además, son agentes de afecciones cutáneas y sistémicas. Las formas sistémicas suelen tener desenlace fatal, por lo que es prioritario conocer el perfil de sensibilidad in vitro frente a los antifúngicos. El estándar M27-A3 del Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) es aplicable a Candida spp. y a Cryptococcus neoformans para determinar la sensibilidad in vitro, pero no lo es para Malassezia spp.; a la fecha no existen métodos estándar para las levaduras lipofílicas. El objetivo fue determinar la sensibilidad in vitro de dos especies de Malassezia frente a cinco antifúngicos de uso clínico. Se estudiaron 59 cepas del género Malassezia, 39 Malassezia furfur (M. furfur) y 20 M. sympodialis, previamente identificadas por métodos convencionales y moleculares. Se determinó la concentración inhibitoria mínima (CIM) según el M27-A3 con modificaciones para asegurar el desarrollo de los microorganismos: el medio RPMI 1640 fue suplementado con glucosa, peptona, bilis de Buey, glicerol y Tween 40 y 80. Las placas se incubaron a 32ºC y la lectura fue visual a las 96 horas. Se evaluaron: fluconazol (FZ), ketoconazol (KZ), voriconazol (VZ), itraconazol (IZ) y anfotericina B (AB). Al no existir puntos de corte para Malassezia spp. no se asignaron las categorías de sensible o resistente para los aislamientos; se calculó la media geométrica (MG) y el rango para cada antifúngico. Las modificaciones realizadas al M27-A3 permitieron el desarrollo óptimo de las especies estudiadas. La lectura e interpretación de la CIM pudo ser realizada a las 72 horas de incubación. Los rangos de CIM (μg/mL) obtenidos para M. furfur y M. sympodialis respectivamente fueron: FZ: ≤0,13-≥64 y ≤0,13 -4; KZ: ≤0,03-0,25 y ≤0,03-0,06; IZ: ≤0,03-0,13 y ≤0,03-0,06; VZ: ≤0,03-0,5 y ≤ 0,03-0,06; AB: 0,25-4 y 0,13-4. La MG fue (μg/mL) FZ: 3,29 y 0,58; KZ: 0,04 y 0,03; IZ: 0,04 para ambas especies; VZ: 0,08 y 0,04; AB: 1,02 y 0,56. El medio RPMI 1640 suplementado permitió un crecimiento adecuado de las dos especies y a las 72 horas se obtuvo una lectura clara de la CIM. M. furfur y M. sympodialis mostraron diferente perfil de sensibilidad frente a los antifúngicos testeados. En general, los antifúngicos ensayados fueron más activos in vitro frente a M. sympodialis. Para ambas especies, el KZ, el IZ y el VZ fueron las drogas más activas y con menor variabilidad de CIMs intra e interespecies. Por el contrario, FZ y AB mostraron CIMs más elevadas y con mayor variabilidad intra e interespecies. Estos hallazgos refuerzan la importancia, no solo de realizar la correcta identificación, sino también, de estudiar en cada aislamiento, el perfil de sensibilidad in vitro frente a los antifúngicos.