Análisis funcional de un antitransportador NHX de Lotus Tenuis

Abstract

La aplicación de ingeniería genética en estudios de estrés posibilita el análisis del comportamiento que tendrían genes sobre procesos bioquímicos y fisiológicos relacionados con la defensa de plantas al estrés. El estrés salino es uno de los principales estreses abióticos que afectan seriamente el crecimiento y rendimiento de los cultivos. Una de las estrategias para evitar la toxicidad de las plantas en salinidad es por compartimentalización del Na+ en vacuolas mediante transportadores NHX, localizados en el tonoplasto. Éstos mantienen la homeostasis, disminuyendo la toxicidad celular y permitiendo el crecimiento de las plantas. Con el fin de evaluar la importancia del gen codificante de NHX1 en la tolerancia a salinidad, se obtuvieron plantas de Lotus tenuis modificadas genéticamente con el vector p35s:LtNHX1, mediante el método indirecto de transformación. A los 90 días de cultivo, en el medio de regeneración/selección el 36% de explantes brindaron 3±1 yemas/explante, obteniéndose tres genotipos transformados (eficiencia de transformación 3.75%). Se seleccionó el genotipo N2249 y se comparó el crecimiento de brotes o capacidad de regeneración de folíolos con el salvaje, en medios de cultivo con 100mM NaCl. En el ensayo de crecimiento, a los 45 días, sobrevivió el 50% de brotes del genotipo salvaje, con una tasa de crecimiento relativo TCR= 0.1±0.07 mm/mm.día; en cambio en N2249 sobrevivió 76% de los brotes con TCR= 0.3±0.02 mm/mm.día. En cuanto a la capacidad de regeneración de folíolos se observó en ambos genotipos una regeneración cercana al 50% y que el número de yemas adventicias formadas por explante, fue superior en N2249 respecto al salvaje (11±7 y 3.7±2, respectivamente). Los resultados muestran la funcionalidad del gen codificante de NHX1 para atenuar los efectos deletéreos de la salinidad.