Daño vascular inducido en el pie equino por veneno de la serpiente Bothrops diporus

Abstract

Con el objeto de avalar la sensibilidad del veneno ofídico sobre la densa red vascular que irriga el pie equino, se analizaron los efectos in vitro de 50 μg de veneno, a través de biopsias de talones de 5 equinos de raza indefinida. Las muestras se incubaron en placas de cultivo celular conteniendo medio DMEM (Dulbecco´s Modified Eagle´s Medium). Un grupo de muestras operó como control y otro fue tratado con veneno, en estufa a 37ºC, con 5% de dióxido de carbono y 95% de humedad durante 24 y 48 h. Concluida la incubación, las muestras se fijaron en formaldehído bufferado y se procesaron con las técnicas clásicas para histopatología, siendo teñidas con HyE y PAS para su observación en microscopio óptico. Las muestras destinadas a microscopía electrónica de transmisión (MET) fueron tratadas por el método clásico. En los cortes coloreados (HyE) las arteriolas presentaron desprendimiento de células endoteliales, los núcleos fueron fuertemente basófilos, aumentados de tamaño y de forma redondeada. Las metaarteriolas presentaron disrupción de la pared vascular y separación de las capas que forman su túnica media, con macrocariosis endotelial. Las vénulas mostraron los mismos daños, manifestándose además la ruptura de la pared vascular. La técnica PAS permitió localizar daños a nivel de la membrana basal de las células endoteliales de todos los vasos sanguíneos estudiados. La MET reveló mitocondrias que resaltaban en puntos determinados del citoplasma, con aumento de la electrodensidad. Las vesículas pinocíticas citoplasmáticas mostraron tamaño variable, con distribución irregular; las uniones intercelulares estaban alteradas. El modelo experimental de biopsia, como cultivo primario, permitió el estudio de alteraciones en la red vascular inducidas por toxinas de veneno de serpiente, constituyendo una herramienta valiosa considerando que no afecta la salud del animal.

In this work we study the effects caused by the venom of Bothrops diporus on the dense vascular network that supplies the equine foot. In order to analyze the in vitro effects, samples of the knee area of five horse hoofs were incubated in DMEM (Dulbecco´s Modified Eagle´s Medium) plus 50 ug snake venom in cell culture plates. Samples incubated with DMEM and without venom were considered as controls. All the samples were incubated at 37 °C in a 5% carbon dioxide atmosphere, 95% humidity during 24 and 48 hours. After incubation samples were fixed in buffered formaldehyde and processed according to the classical techniques for histopathology, stained with hematoxylin and eosin (H&E) and periodic acid-Schiff (PAS) for observation under optic microscope. Samples for transmission electron microscopy (TEM) were treated by the classic method. Samples stained with H&E showed arteriolar endothelial cell detachment, strong basophilic, enlarged and rounded nuclei. The metarterioles had disruption of the vascular wall and separation of the layers of the tunica media with endothelial macrocariosis. Venules showed the same damage as well as disruption of the wall vessel. PAS staining showed damage at the basal membrane of endothelial cells of all the vessels under study. TEM showed mitochondria in certain parts of the cytoplasm with increased electrodensity. Pinocytic citoplasmic vesicles showed variable size, with irregular distribution, with altered cell junctions. The experimental model using biopsy as the primary culture allowed the study of alterations in the vascular network induced by the toxins present in the venom. Thus, it can be considered a useful tool considering as it does not affect the animal’s health.