Acción de venenos ofídicos del género Bothrops (yarará) sobre la membrana de eritrocitos de carnero

Abstract

El estudio de la resistencia globular osmótica (RGO) es importante en la determinación de ciertos problemas clínicos, como así también modificaciones morfológicas de la membrana plasmática del eritrocito. Glóbulos rojos de carneros fueron incubados con veneno de serpientes del género Bothrops (B. diporus, B. jararaca, B. jararacussu, B. moojeni) durante 30 minutos a 37ºC. Posteriormente fueron sometidos a soluciones de NaCl de osmolaridad decreciente (0,85 a 0,20 g/l), incubándose a 4ºC durante un máximo de 3 horas, para luego leer en espectrofotómetro la absorbancia del sobrenadante a 540 nm. Los eritrocitos incubados con los distintos venenos también fueron examinados al microscopio óptico y electrónico de barrido. Todos los venenos ensayados mostraron un comportamiento similar, siendo la RGO mínima de 0,70 g/l de NaCl y la máxima de 0,20 g/l, excepto para el veneno de B. jararacussu que causó hemólisis máxima con 0,50 g/l. La microscopía óptica mostró eritrocitos con poiquilocitosis y espiculados; mayores alteraciones de la membrana plasmática fueron detectadas por microscopía electrónica de barrido. Algunos venenos indujeron daños más severos que otros; en general se registró disminución del tamaño celular, mientras que con el veneno de B. jararacussu la mayoría de las células presentaba destrucción de su membrana. Se resalta que el presente estudio es un ensayo in vitro, y que en un paciente con accidente de mordedura, los eventos ocurren con participación de componentes endógenos que configuran un entorno diferente, facilitando o impidiendo la actividad lítica.

The study of erythrocyte osmotic resistance is important in the determination of certain clinical problems, as well as the morphological changes of the plasma membrane of red blood cells. Sheep red blood cells were incubated with snake venom of different Bothops genus (B. diporus, B. jararaca, B. jararacussu, B. moojeni) for 30 minutes at 37°C. Then, they were submitted to decreasing osmolarity solutions (0.85 to 0.20 g/l of NaCl), incubated at 4°C for a maximum period of 3 hours, and then the absorbance of the supernatant was determined at 540 nm using a spectrophotometer. The erythrocytes incubated with different venoms were also observed under optical and electron microscopes. All tested venoms showed a similar behavior, being coincident with the minimum osmotic resistance of 0.70 g/l NaCl and the maximum with 0.20 g/l except for the venom of B. jararacussu that caused the maximum hemolysis with 0.50 g/l NaCl. Optical microscopy showed spiculated erythrocytes and poikilocytosis; major changes in the plasma membrane were detected by electron microscope. Some venoms induced more severe damage than others, and in general a decrease in cell size was observed, while B. jararacussu venom destroyed most of the cell membranes. It is noteworthy to stand out that our studies are in vitro assays, and in a patient with a snake’s bite accident most of the events that take place include endogenous components, with a different environment which may facilitate or prevent the lytic activity.