Evaluación in vitro de la actividad proteolítica de células de carcinoma renal de células claras (Caki-1) en condiciones de hipoxia

Abstract

La proteólisis extracelular es uno de los principales mecanismos por lo que la transformación de la matriz intercelular se desarrolla, y facilitala metástasis tumoral. Las enzimas que la catalizan se denominan metaloproteinasas de la matriz (MMPs); son proteinasaspertenecientes a una amplia familia, que se asocian con tumorigénesis, renovación de la matriz extracelular y la migración de células cancerosas, control del crecimiento, in amación y angiogénesis. Dados estos roles tan centrales en la biología del cáncer, desde hace tiempo vienen siendo estudiadas, pero son prácticamente inexistentes los trabajos que las relacionan con su expresión en condiciones hipóxicas y más aún en Carcinoma Renal de Células Claras (CRCC). Por tal motivo, en el presente trabajo, se inició la caracterización de la expresión de MMPs secretadas por células Caki-1, modelo celular ampliamente validado para el CRCC. Utilizando un modelo in vitro de cultivo celular se generó hipoxia con el agregado de CoCl2 (100, 200 y 300 uM) y se evaluó si la hipoxia in uye en la actividad proteolítica del sobrenadante celular. Se utilizó SDS-PAGE para analizar el per l proteico y la técnica de zimografía para determinar la actividad gelatinolítica. Asimismo, se estudió la expresión de las MMPs (2, 9 y 13) por Dot-Blott. Los resultados hallados muestran que la hipoxia exacerba la actividad proteolítica de estas células, y que en dicha actividad están implicadas las enzimas MMP-2 y MMP-13, principalmente y en menor grado MMP-9, secretadas al medio extracelular. Actualmente, se está expandiendo la búsqueda de otras isoformas de MMPs (tales como MMP1, MMP8, MMP-21) y evaluando su expresión en el otro modelo validado de CRCC, las células Caki-2.