Deshidratación y reconstrucción de eritrocitos parasitados con Babesia bovis y Babesia bigemina para permitir su uso como inmunoprofiláctico

Abstract

El objetivo planteado en el presente trabajo consiste en la búsqueda y puesta a punto de un nuevo método inmunoprofiláctico frente a la Babesiosis bovina, que implique una vacuna en su versión deshidratada. Para esto, se realizó la comparación de técnicas de deshidratación de glóbulos rojos (GR), como alternativas para la conservación de los hemoparásitos Babesia bovis (B. bovis) y Babesia bigemina (B. bigemina), que podrían ser utilizadas con fines inmunoprofilácticos. Se iniciaron cultivos in vitro a partir de eritrocitos parasitados con B. bovis y B. bigemina. Los GR obtenidos en fase estacionaria fueron centrifugados y separados del sobrenadante (SN), el cual fue descartado. El paquete globular (PG) fue mezclado en partes iguales con soluciones criopreservadas: Dimetilsulfóxido (DMSO), Polivinilpirrolidona (PVP), Glicerol y Dextrosa. Las suspensiones preparadas, se dispusieron en crioviales que pasaron a una curva de congelación y fueron sometidas a un proceso de liofilización. Se incluyó, además, el secado por spray-drying. Por ambas técnicas se obtuvo un polvo fino, uniforme y adecuadamente deshidratado. A partir de éstos, se realizaron reconstituciones con buffer fosfato (PBS), solución de Vega y Martínez (VYM), solución fisiológica, agua destilada y solución de sacarosa 0,25, 0,50 y 1 M. Fueron evaluados morfología e integridad de membrana a través de microscopía óptica, microscopía de barrido electrónico, técnicas de hemocitometría y tinciones vitales, como Azul de Tripán. Se evidenció entonces, que el crioprotector más adecuado es la PVP y que el mejor reconstituyente, tanto para los glóbulos rojos liofilizados como para los secados por aspersión fue la solución de sacarosa 0,25 M. Se obtuvieron mejores condiciones de recuperación de los eritrocitos reconstituidos en los liofilizados respecto de los obtenidos por pulverización, pudiéndose apreciar un alto número de glóbulos rojos liofilizados y reconstituidos con morfología conservada. De esta manera, se logró la deshidratación y evaluación de los reconstruidos, siendo necesarios estudios posteriores utilizando el inmunógeno en la especie susceptible.