Gametogénesis en rhinella bergi (Céspedez, 2000) (anura: bufonidae) : aspectos histológicos e inmunohistoquímicos asociados a eventos de apoptosis y proliferación celular

Abstract

El estudio de la biología reproductiva comúnmente involucra el análisis de caracteres anatómicos y funcionales además de la influencia de los eventos intrínsecos y extrínsecos del proceso. Esto incluye las características generales del sistema reproductor y sus cambios a lo largo del ciclo reproductivo, procesos de espermatogénesis y ovogénesis, regulación neuroendocrina y ambiental de la actividad reproductiva, comportamiento reproductivo de machos y hembras y eventos de proliferación celular y apoptosis, asociados a la atresia folicular y recrudescencia gonadal. Los anuros presentan una gran diversidad en sus modos, estrategias reproductivas y de desarrollo. Las diferentes especies exhiben características reproductivas particulares en respuesta al medio que habitan. La progresión de la gametogénesis de los anfibios está regulada por varios factores, y el equilibrio dinámico entre la proliferación y la muerte de las células germinales es un factor decisivo que determina la velocidad a la que se produce la gametogénesis. La apoptosis es un proceso fisiológico de muerte celular programada, responsable de la eliminación de células germinales en todas las etapas gametogénicas, como así también, de otras líneas celulares del organismo. El presente estudio tiene como objetivo caracterizar las gónadas y los procesos de foliculogénesis y espermatogénesis de machos y hembras de Rhinella bergi detectando los eventos de proliferación celular y apoptosis, a través de un análisis anatómico, histológico e inmunohistoquímico. Este análisis pretende contribuir al conocimiento de los procesos involucrados durante la foliculogénesis y espermatogénesis de la especie mencionada. Para ello, se trabajó con ejemplares colectados previamente en las estaciones de primavera y verano (2014-2015) incluidos en la Colección Didáctica de la asignatura Histología Animal de la UNNE, en los cuales se estudiaron las gónadas a partir del análisis morfológico, histológico e inmunohistoquímico. Se analizó la anatomía del sistema reproductor en microscopio estereoscópico y microscopio electrónico de barrido (MEB). Se realizaron preparados histológicos siguiendo el protocolo convencional de deshidratación, inclusión en parafina y coloración con hematoxilina-eosina; tricrómica de Mallory y reacciones histoquímicas de PAS. Para caracterizar las células mitóticas y meióticas activas en ovarios y testículos, se realizó la inmunomarcación con la proteína de proliferación celular PCNA. Para la detección de eventos de muerte celular programada se procedió con la inmunomarcación de la proteína de la familia Bcl (Bax y Bcl- XL). Además, se calculó el IA (índice apoptótico) e IP (índice proliferativo) en base a la inmunomarcación de los órganos reproductores. Las características anatómicas, tanto como la gametogénesis y los procesos de proliferación celular y muerte que subyacen a dicho evento en Rhinella bergi concuerdan con lo propuesto para otras especies analizadas de la familia Bufonidae. Con respecto a la proliferación celular durante la ovogénesis, se da principalmente en hembras juveniles y ovulatorias de primavera. La apoptosis en el ovario es más marcada en los ovarios de las hembras post-ovulatorias, en las cuales se observó un predominio de folículos atrésicos. Dichas hembras corresponden a ejemplares colectados en verano. La proliferación celular durante la espermatogénesis se da en espermatogonias y espermatocitos I. Con un mayor índice proliferativo de espermatogonias en primavera. La apoptosis en el testículo es significativamente mayor en el período comprendido entre los meses de enero y marzo, con alta incidencia apoptótica en testículos de individuos recolectados en meses de verano. Al analizar cuáles son los estadios de la espermatogénesis que sufren muerte celular, se observó que la apoptosis ocurre en los espermatocitos I, II y en las espermátidas. El órgano de Bidder presenta actividad proliferativa en primavera y actividad asociada a eventos de muerte celular en verano. Los resultados del presente trabajo sirven como base para posteriormente caracterizar el ciclo reproductivo de Rhinella bergi; y a la vez, proporciona información antecedente sobre el análisis de la actividad gametogénica por IHQ a partir del estudio de la expresión de la proteína de proliferación celular PCNA y muerte celular (Bax-Bcl-XL). Futuros análisis estarán focalizados en la evaluación del ciclo reproductivo en dicha especie tanto en ovarios y testículos como órgano de Bidder, a fin de comparar y correlacionar con los resultados obtenidos en este estudio.