Efecto del tiempo de preservación empleando el método de Castellani y la crioconservación sobre la actividad enzimática en Candida albicans
Resumen
Debido al incremento en la incidencia de las infecciones causadas por levaduras
del género Candida, hay un gran interés en la investigación de sus factores de
virulencia con la finalidad de establecer una relación entre estos factores y la
patogenicidad, diseñar estrategias de control y prevención de las candidiasis, así como
desarrollar nuevos agentes terapéuticos con estos factores como posibles blancos de
acción.
A pesar de que existen numerosas publicaciones en las cuales se examina la
producción de enzimas hidrolíticas en aislados de C. albicans y su papel en la
patogénesis de las candidiasis, la preservación de la secreción enzimática a lo largo
del tiempo de conservación aún no ha sido exhaustivamente estudiada. La
conservación de cepas de Candida es indispensable en un laboratorio de Micología
debido a que son consideradas material necesario para enseñanza, investigación y
como testigos para estudios especiales. Un método muy utilizado y que aporta altos
porcentajes de viabilidad, es la suspensión en agua destilada estéril.
El objetivo general de este trabajo fue evaluar el efecto del tiempo de preservación
empleando los métodos de Castellani y congelación sobre la actividad esterasa,
fosfolipasa y proteinasa de Candida albicans. Se utilizaron 30 cepas aisladas a partir
de muestras clínicas provenientes de pacientes tanto intra como extra hospitalarios del
Hospital del Carmen de Mendoza. El aislamiento de cada cepa, se realizó en agar
glucosado Sabouraud y en medio CHROMagarTM Candida. El estudio
micromorfológico se realizó en el medio agar harina de maíz y la identificación
definitiva se realizó por espectrometría de masas por sistema MALDI-TOF.
Todas las cepas fueron conservadas según los métodos de Castellani y
congelación durante 0, 2, 4, 6 y 12 meses. Luego de transcurrido cada uno de esos
tiempos, se registró la viabilidad y midió la actividad enzimática. Para determinar la
producción de proteinasas, fosfolipasas y esterásicas se utilizaron los medios albúmina sérica bovina, Sabouraud yema de huevo y el test de opacidad del Tween
80, respectivamente. Las lecturas de cada actividad se realizaron a las 24, 48 y 72
horas de incubación midiendo el diámetro de la colonia y el diámetro de la colonia más
el halo o la zona de hidrólisis. A partir de la relación entre estos valores se calcularon
los índices Pz.
Al evaluar el porcentaje de supervivencia de las cepas de C. albicans conservadas
durante un año con el método de congelación, se pudo comprobar la eficacia de este
método, ya que, de las 30 cepas evaluadas se recuperó el 100% al año de
conservación. Mientras que, con el método de Castellani, la viabilidad que se obtuvo
fue del 66,67%.
Los resultados obtenidos en esta tesis conforman las primeras estimaciones sobre
el efecto del tiempo de conservación empleando los métodos de Castellani y el de
congelación sobre la actividad enzimática en cepas de C. albicans y demostraron que
la evolución de las tres actividades enzimáticas a lo largo de todo el ensayo, fue
diferente. Mientras que la actividad esterásica mostró menor actividad enzimática que
se mantuvo constante durante los 12 meses, la actividad fosfolipasa en la primera
medición temporal, presentó mayor actividad enzimática que disminuyó con el
transcurrir del tiempo. En tanto que, la actividad proteolítica tuvo un comportamiento
opuesto a la fosfolipasa, incrementando su actividad al final del ensayo. No se
obtuvieron diferencias estadísticamente significativas entre ambos métodos de
conservación.
Es importante continuar con los estudios que evalúen actividades enzimáticas
(proteasas, fosfolipasas, esterasas, hemolisinas y coagulasas) así como otros factores
de virulencia, como son: adherencia, cambio fenotípico, morfología celular y
producción de biopelículas en cepas de C. albicans y en otros microorganismos, para
determinar su estabilidad a lo largo del tiempo de conservación por distintos métodos e
identificar hasta qué momento se pueden preservar las cepas aisladas para garantizar
la reproducibilidad de las investigaciones.
Colecciones
- Tesis de maestría [54]