Juliprosina y juliprosopina, principales responsables de toxicidad de Neltuma flexuosa

Abstract

El género Neltuma flexuosa (Prosopis flexuosa), vulgarmente conocido como “Algarrobo”, es un árbol que se halla en distintas regiones del mundo. Las vainas de Neltuma están entre los alimentos más antiguos utilizados para la alimentación de los animales debido a su alto valor nutricional. En Brasil y Argentina se han reportado casos de intoxicaciones en animales con signos neurológicos tras un consumo prolongado de las vainas de N. julifora y N. flexuosa. Los principales alcaloides identificados son juliprosina (JPS) y juliprosopina (JPSP), ambos piperidínicos. A partir de estudios in vitro se observó variación de la citotoxicidad entre poblaciones de N. flexuosa recolectadas en tres años diferentes. Hasta el momento no se confirmó la responsabilidad de los alcaloides piperidínicos de N. flexuosa en la toxicidad in vivo e in vitro. El objetivo de este trabajo fue evaluar la citotoxicidad de cada fracción del extracto de N. flexuosa y el posterior análisis de alcaloides. Para ello se empleó el extracto total con mayor contenido de JPS y JPSP, el cual fue fraccionado por columna flash, obteniendo cinco fracciones ya descriptas. Para los ensayos de citotoxicidad se empleó la línea celular derivada de glioma C6 (ATCC:CCL-107 ™). Estas fueron sembradas en placas de 96 pocillos, a una concentración por well de 3.0 x 104 células en medio de crecimiento (DMEM-SFB 10%). Al alcanzar la monocapa una confluencia del 80%, se retiró el medio de cultivo y diferentes concentraciones de cada fracción (F: I, II, III, IV y V) (2,5-10 μg mL-1) fueron adicionadas a las células (200 μL/pocillo) para luego incubarse por 48h a 37°C y 5% de CO2. La viabilidad fue determinada mediante el ensayo del colorante cristal violeta. Posteriormente, la F más citotóxica fue analizada mediante HPLC-HRMS para la identificación y cuantificación de los alcaloides. Luego de 48 h de exposición, la FIV evidenció un efecto citotóxico dosis dependiente, siendo estadísticamente significativa con respecto al control y a las demás fracciones (p≤0,05). Las células no tratadas y tratadas con las F: I, II, III y V se encontraban homogéneamente distribuidas en el cultivo y presentaban una forma delgada y alargada. En cuanto a las células expuestas a la FIV, tras la incubación con las concentraciones ensayadas se registraron diversos cambios morfológicos, que incluían el redondeo de las células y pequeñas vacuolas citoplasmáticas. También, se observaron áreas desprovistas de células, siendo aún más evidente a 10 μg mL-1. A partir del análisis de la FIV por HPLC-HRMS se identificaron la JPS y JPSP con concentraciones de 5,2 μg mL-1 y 14,1 μg mL-1, respectivamente. Estos resultados confirman que la toxicidad de N. flexuosa está dada por estos alcaloides piperidínicos. Sin embargo, son necesarios futuros estudios para determinar cuál de ellos es el principal responsable de la toxicidad.