Análisis histoquímicos del daño muscular inducido por veneno de Bothrops alternatus (víbora de la cruz) de Argentina

Abstract

Se emplearon métodos histoquímicos para estudiar la necrosis de fibras musculares esqueléticas inducida por veneno de Bothrops alternatus de Argentina. Se utilizaron ratas con peso corporal de 220–270 g. Estos animales recibieron 800 µg de veneno vía i.m. en el músculo grastrocnemio. Las muestras de sangre fueron tomadas de la cola a los 60 min, 3, 6, 12 y 24 horas luego del envenenamiento, para realizar determinaciones de creatinfosfoquinasa (CPK). Luego de 24 horas, las ratas recibieron anestesia con hidrato de cloral para realizar análisis histológicos con tinción Hematoxilina–Eosina (H–E) y también estudios histoquímicos tales como peroxidación de lípidos (reacción de Schiff) y precipitación de calcio (tinción rojo de alizarina). Los resultados mostraron un incremento de los niveles de CPK, cuyo acmé se registró a las 3 horas post–envenenamiento. Las pruebas revelaron una intensa destrucción de fibras musculares como consecuencia de una significativa peroxidación de lípidos y también por precipitación de calcio. Se concluye que el veneno de B. alternatus conduce a peroxidación de lípidos acompañada de precipitación citoplasmática de calcio. Además, se demuestra que la tinción H–E efectuada en cortes por congelación (técnica histoquímica) es eficaz para evidenciar una vista tisular panorámica de los cambios musculares causados por el veneno de B. alternatus, con la ventaja de exigir un lapso de ejecución más corto (pocas horas), con relación al método H–E clásico (técnica histológica), la cual exige varios días de procesamiento.

Histochemical methods were used to study necrosis of skeletal muscle fibers induced by Bothrops alternatus snake venom from Argentina. Rats with a body weight between 220–270 g, were used. Animals received an i.m. venom injection (800 μg) in the gastrocnemius. To determine creatinphosphokinase activity (CPK), blood samples were taken from the tail 60 min, 3, 6, 12 and 24 h after the envenoming. About 24 h later, rats received chloral hydrate anesthesia for histological analysis with Hematoxilin–Eosin (H–E) stain, and histochemical studies such as lipid peroxidation (Schiff’s reaction), and calcium precipitation (alizarin red stain). Results showed an increment in plasma CPK level, with its major peak at 3 h. Histochemical analyses revealed an intense destruction of muscular fibers as a consequence of a significant lipid peroxidation and calcium precipitation as well. Histochemical methods can be considered as a valuable tool in applied research regarding toxicological problems such as snake venom intoxication. It can be concluded that B. alternatus snake venom leads to a lipid peroxidation accompanied by citoplasmatic calcium precipitation. In addition, it was demonstrated that H–E stain made on frozen cuts (histochemical technique) is effective to evidence a panoramic tissular view of muscular lesion caused by B. alternatus venom, with the advantage of demanding a shorter execution lapse (few hours) in relationship to classic H–E histological technique, which requires several days of procesing.