Evaluación citotóxica y morfológica de células gliales expuestas al extracto de Prosopis flexuosa

Abstract

Juliprosine y juliprosopine son alcaloides piperidínicos y son los principales componentes tóxicos presentes en las vainas de Prosopis flexuosa, capaces de producir sintomatología nerviosa en rumiantes. A partir del extracto se pretende determinar la concentración citotóxica 50 (CC50) y evaluar posibles alteraciones morfológicas y la expresión de GFAP en la línea celular C6. En los ensayos de citotoxicidad se emplearon la línea C6 células de glioma (ATCC:CCL-107TM), las células resuspendidas se sembraron en placas de 96 pocillos, 30.000 a 35.000 células por pocillo, en el mismo medio de crecimiento (DMEM-SFB 10%). Al alcanzar la monocapa con un 80% de confluencia, se retiró el medio de cultivo y diferentes concentraciones del extracto de P. flexuosa (5-50 μg/ml) fueron adicionados a las células en cultivo (200 μL/pocillo) y se incubaron por 48h a 37°C y 5% de CO2. Se evaluó cuantitativamente la viabilidad mediante el colorante cristal violeta. Para el análisis morfológico se empleo la tinción de Rosenfeld y la inmunocitoquimica con el anticuerpo GFAP. Los resultados evidenciaron que el extracto de P. flexuosa disminuye la viabilidad celular de manera dosis dependiente. La concentración citotóxica 50% (CC50) determinada 48h después de la exposición fue de 35,68 μg/mL. Se registraron alteraciones morfológicas en los vidrios tratados con 10 y 15 μg/ml de extracto, las que incluyeron células con prolongaciones gruesas e irregulares, retracción de cuerpos celulares, diversos grados de condensación de la cromatina, vacuolización citoplasmática y algunas células agrupadas en pequeños cúmulos. A la inmunocitoquimica, los niveles de expresión de GFAP fueron menores en las células tratadas con 20 μg/ml (21,14±3,7 %) con respecto al control (28,55 ±3,1 %). Las alteraciones morfológicas observadas junto a la pérdida de GFAP, posiblemente precedan a la muerte celular.