Aislamiento e identificación de hongos del suelo entomopatógenos en campos citrícolas

Abstract

La citricultura mundial está siendo afectada por la enfermedad conocida como Huanglongbing (HLB) o “Greening citrus desease” cuyo agente causal es la bacteria Candidatus liberibacter spp., de tipo Gram-negativa, exclusivamente localizada en los tubos del floema. Su vector biológico en América es el insecto Diaphorina citri (Hemiptera: Psyllidae), conocido comúnmente como “psílido asiático de los cítricos”. Aunque no es peligrosa para los humanos, destruye la producción, apariencia y valor económico de los árboles de cítricos, el sabor de la fruta y su jugo. En el mundo, es la enfermedad más destructiva de las plantas de cítricos y una vez que un árbol está infectado, no tiene cura: producen frutos amargos, deformes y, con el tiempo, mueren. El HLB ya ha destruido la producción citrícola en varias regiones del mundo, incluida la Florida y Texas (USA), donde las industrias están decayendo con rapidez. Pueden infectarse con HLB todo tipo de árboles cítricos y plantas relacionadas tales como Murraya paniculata (Rutaceae) o Mirto. Son portadoras asintomáticas de la bacteria, y pueden ser fuente de inoculo para el HLB, debido a que también son hospederos del vector de la enfermedad. En condiciones naturales, algunas plagas tienen sus controladores biológicos específicos que se encuentran presentes en el aire o en el suelo, y se concentran en las proximidades de las plantas afectadas. Entre los controladores de insectos están los hongos entomopatógenos. Estos hongos son predadores naturales de nematodos e insectos, y están ampliamente distribuidos en la naturaleza. Para el aislamiento de estos hongos las muestras se colectan en el hábitat natural del insecto. El objetivo de este trabajo fue identificar y aislar hongos entomopatógenos de suelos de plantaciones cítricas para evaluarlos como potenciales agentes de bio-control de huevos, ninfas y adultos de Diaphorina citri. Para el aislamiento, hemos obteniendo hongos directamente del vector; y también utilizado la técnica de tierra rociada y técnica de pesca con anzuelo. Se tomaron 100 muestras de tierra de 2 campos agro-ecológicos, obteniéndose finalmente 10 muestras compuestas. Los brotes de Murraya paniculata con huevos, ninfas, y adultos de D. citri fueron recolectados en invernaderos del INTA Bella-Vista. Los hongos que desarrollaron sobre el insecto directamente, o usando las técnicas artificiales, se repicaron en medios de cultivo PCA (potato-carrot agar) y PDA (potato-dextrose agar), y se los incubó a temperatura ambiente durante 7 días, para su aislamiento e identificación. La identificación de las cepas fúngicas obtenidas mediante ambas técnicas, se llevo a cabo usando lupa estereoscópica, microscopio óptico, y claves de identificación basadas en caracteres macro y micro-morfológicos. Los cultivos puros se conservaron en el Cepario del Laboratorio de Micología del IBONE. De las 20 muestras compuestas de suelo y de los 20 brotes frescos de Murraya paniculata se aislaron, contando una sola vez por muestra, 124 cepas fúngicas, clasificadas en 31 géneros y 45 especies. Este estudio permitió recuperar hongos de los géneros Acremonium, Alternaria, Arthrobotrys, Aspergillus, Cladosporium, Colletotrichum, Engyodontium, Fusarium, Hapsidospora, Helicoon, Humicola, Melanospora, Neocosmospora, Oidium, Papulospora, Penicillium, Purpureocillium, Thielaviopsis, Trichoderma, como también Hialinos S/F, levaduras, Zygomycete, y Basidiomycete. Se identificaron géneros fúngicos saprófitos como Cladosporium sp. y Penicillium sp.; oportunistas de animales y humanos como Rhyzopus sp., Purpureocillium sp., Alternaria sp. , Aspergillus sp.; fitopatógenos como Fusarium sp. ,Acremonium sp., Phoma sp., Zygomycetes; y entomopatógenos ya conocidos como Arthrobotrys y Helicoon. Merecen especial consideración ocho taxones aislados, ya reportados en la literatura como hongos con capacidad entomopatógena y como bio-controladores de insectos. No se ha encontrado bibliografía que describa la interacción de estos ocho taxones de interés con huevos-ninfas-adultos de D. citri, por lo que son necesarios más estudios para evaluar su antagonismo.