Ensayos de citotoxicidad in vitro : Comparación de MTT y cristal violeta en dos líneas celulares expuestas al extracto de Ipomoea carnea

Abstract

Los ensayos de citotoxicidad se utilizan ampliamente en los estudios toxicológicos in vitro. Existen varios ensayos, los más comúnmente empleados para la detección de citotoxicidad o viabilidad celular tras la exposición a sustancias tóxicas son la liberación de LDH, el rojo neutro, el MTT y cristal violeta. La planta I. carnea contiene swainsonina y calisteginas, ambos son alcaloides y responsables de producir una enfermedad de almacenamiento lisosomal (EAL) de origen adquirido en rumiantes principalmente. El objetivo del estudio fue comparar dos ensayos de citotoxicidad y evaluar la sensibilidad de dos líneas celulares (glía y epitelial) expuestos al extracto alcaloidal de I. carnea. Para los ensayos de citotoxicidad se emplearon las líneas celulares derivadas de glioma C6 (ATCC:CCL-107 ™) y epitelial mamaria LM3 (RRID:CVCl-D269). Estas fueron sembradas en placas de 96 pocillos, a una concentración por well de 3.0 x 104 células en medio de crecimiento (DMEM-SFB 10%). Al alcanzar la monocapa una confluencia del 80%, se retiró el medio de cultivo y diferentes concentraciones (100-400 μM de SW presente en el extracto) fueron adicionadas a las células (200 μL/pocillo) para luego incubarse por 48h a 37°C y 5% de CO2. La viabilidad fue determinada mediante el ensayo del colorante cristal violeta (CV) y MTT. Luego de 48 h de exposición, las células de las líneas C6 y LM3 tratadas con diferentes concentraciones del extracto evidenciaron a partir de ambos ensayos un efecto citotóxico dosis dependiente, siendo estadísticamente significativo con respecto al control (p ≤ 0.05). La disminución de la viabilidad fue más evidente en las células de la línea LM3 con respecto a C6 a la concentración más alta ensayada (MTT: 12% vs 47% y CV: 21% vs 40% respectivamente). Ambos ensayos reflejaron similares resultados, no siendo estadísticamente significativos (p ≤ 0.05). A partir del análisis se sugiere que las células gliales podrían ser menos susceptibles que las células epiteliales a los efectos de los alcaloides presentes en I. carnea. A pesar de que ambas técnicas de citotoxicidad no arrojaron diferencias, es conveniente utilizarlas para aumentar la fiabilidad de los resultados obtenidos