Técnica rápida de Dot-ELISA para inmunodiagnóstico de toxocariosis humana

Abstract

La Toxocariasis humana es una zoonosis producida por larvas de nematodes del género Toxocara. Se puede presentar como Síndrome de Larva Migrans Visceral (SLMV) o como Síndrome de Larva Migrans Ocular (SLMO), según el tejido afectado. La infección humana por este parásito ocurre de forma accidental, como consecuencia de convivir con perros y gatos, siendo considerada una enfermedad cosmopolita. Las poblaciones con condiciones socio-sanitarias deficientes son candidatas a contraer la infección debido a que poseen todos los factores favorables para su desarrollo, destacándose la región del nordeste argentino (NEA). Una forma precisa de confirmar esta enfermedad es mediante los métodos serológicos como ELISA, inmunoblotting o Dot-ELISA, siendo una limitación el acceso a los kits comerciales. El objetivo de este trabajo es desarrollar un test rápido basado en la técnica de Dot-ELISA para que pueda ser aplicada como un test de tamizaje en el diagnóstico serológico de la Toxocariosis humana, y para estudios de vigilancia epidemiológica. Primeramente, se obtuvieron los Antígenos secreción/excreción de larvas de segundo estadio de Toxocara (TES) autóctonos, luego se utilizaron para la sensibilización tanto de placas para la técnica de ELISA, como así también para tiras de nitrocelulosa del Dot-ELISA. Posteriormente se bloquearon con TBS-Tween leche descremada 5%. Las muestras, además de los controles negativo y positivo, se diluyeron con TBS-Tween leche 1% y se agrega anti-IgG humana conjugada con peroxidasa y 4-cloro-1-naftol como sustrato revelador. Para estandarizar el Dot-ELISA se fueron combinando diferentes volúmenes de reactivos, soportes, tiempos de incubación y concentraciones. Los diversos ensayos permitieron encontrar las condiciones óptimas para esta técnica. Las tiras de almacenamiento prolongado, dieron reacciones positivas más débiles. El grado de concordancia con el método ELISA estándar demuestra una resolución buena (k = 0,72). Adicionalmente, la alta sensibilidad y especificidad obtenidas permite destacar al dot-ELISA como un método adecuado para ser utilizado como test de screening en la detección de anticuerpos anti-Toxocara. La seropositividad obtenida con la técnica estandarizada sobre 41 muestras procedentes de Basail, Chaco fue de 39%. La seroprevalencia fue levemente mayor en adultos que en niños. Los elevados valores de seroprevalencia reflejan la necesidad de contar con herramientas diagnósticas accesibles y de fácil realización, siendo útil implementar la prueba Dot-ELISA como herramienta rápida

para el diagnóstico de toxocariasis, particularmente en poblaciones con condiciones socio- sanitarias deficientes.