Valoración bioquímica, histopatológica e inmunohistoquímica del daño renal causado por veneno de Bothrops neuwiedii en ratas

Abstract

El objetivo del trabajo fue elucidar algunos aspectos del daño renal causado por veneno de Bothrops neuwiedii (yarará chica), especialmente el rol asumido por la mioglobina, teniendo en cuenta el daño muscular provocado por la mordedura de dicho ofidio. Se dispuso de 35 ratas Wistar de 280 g de peso. Cinco animales fueron inyectados vía IM con 0,2 ml de solución fisiológica (controles que no registraron cambios significativos) y las restantes con 1400 ug del veneno, siendo divididas en 6 grupos de 5 ratas cada uno, acorde al lapso de sacrificio (3, 6, 12 y 24 horas, 7 y 28 días). En dichos lapsos se les extrajo sangre para realizar determinaciones bioquímicas relacionadas a los daños muscular (creatinfosfoquinasa CPK, aspartatoaminotransferasa AST) y renal (urea, creatinina), orina (pH, densidad), así como muestras de tejido renal para estudios histopatológicos e inmunohistoquímicos (detección de mioglobina por anticuerpos policlonales). Las actividades de AST y CPK se elevaron (p < 0,05) con acmés a las 24 y 6 h respectivamente, en el último caso alcanzando valores de 2.895 UI/l, indicadores de severo daño muscular. Ambas enzimas remitieron a valores normales a los 7 días. En suero también aumentaron (p < 0,001) los niveles de creatinina (22,7 mg/l a las 6 horas) y urea (1,52 g/l a las 12 h), señalando la presencia de daño renal. La densidad urinaria declinó a partir de las 12 h post-inoculación, alcanzando su mínimo valor (1.010) a los 28 días. La histopatología reveló cambios progresivos que se iniciaron con degeneración hidrópica y presencia de cilindros hialinos en túbulos proximales y distales, culminando con necrosis tubular y hemorragia intersticial. La marcación para mioglobina resultó positiva a partir de las 3 h en membrana glomerular, células tubulares y luz tubular. Con el transcurrir del tiempo la mioglobina fue detectada en áreas medulares, incluyendo asas de Henle y túbulos colectores. Se concluye que la mioglobina participa decisivamente en la instalación del daño renal provocado por el veneno estudiado.

The objective of this trial was to elucidate some aspects of the renal damage induced by Bothrops neuwiedii (“yarará chica”) venom, caused by myoglobin release after the muscular damage that characterizes this envenoming. Thirty five Wistar rats weighting 280 g, were selected. Five animals were injected IM with 0.2 ml of normal saline solution (control animals, which did not register significant changes). The remaining rats were injected with 1400 ug of venom; six groups of five animals each were constituted, according to time to sacrifice (3, 6, 12 and 24 hours, 7 and 28 days). In each group, blood samples were obtained to determine serum biochemical parameters related with muscle damage (creatin phosphokinase CPK, and aspartate aminotransferase AST activities), renal failure (urea, creatinine), and samples of renal tissue for histopathologic studies and immunohistochemistry (polyclonal antibody for myoglobin). Urine samples were also gathered (for pH and density). AST and CPK activities increased (p < 0.05), with peaks at 24 and 6 h respectively. CPK showed a maximum value of 2895 IU/l, indicating severe muscle damage. Both enzymes returned to normal values in 7 days. In serum, creatinine (22.7 mg/l at 6 h) and urea (1.52 g/l at 12 h) were increased, thus demonstrating renal damage. Twelve hours post-inoculation, urinary density declined, reaching its minimum value (1010) at 28 days. Histopathology showed progressive changes that began with hydropic degeneration and presence of hyaline casts in proximal and distal tubules, and tubular necrosis and interstitial haemorrhage in the final stages. Myoglobin was present in the glomerular membrane, tubular cells and tubular lumen at 3 hours post-inoculation. Later, myoglobin was also observed in medullar area, Henle asa, and collector tubules. In conclusion, myoglobin takes an important role in the settle of kidney damage induced by Bothrops newiedii venom.