Identificación fenotípica de Candida dubliniensis, aisladas de candidiasis de mucosa oral en pacientes inmunocomprometidos en el Hospital Nacional de Clínicas de Córdoba

Abstract

Candida dubliniensis es una levadura de distribución geográfica universal, identificada como agente oportunista, implicada como causa de candidiasis oral en pacientes VIH/sida. Esta especie adquirió jerarquía al descubrirse su asociación con mucositis candidiásica grave de la cavidad oral, esofagitis y otras localizaciones; incluyendo candidemias y candidiasis invasoras y así como por ser más resistente a los tratamientos con antifúngicos (ATF). Sin embargo, la prevalencia de candidiasis oral por levaduras del género Candida y de la especie C. dubliniensis en particular, no es bien conocida, ya que la misma pasa desapercibida en la mayoría de los casos por falta de una correcta identificación. Recién en 1995 fue descrita por primera vez como patógeno emergente. El nombre de esta especie fue propuesto por por Sullivan y col, quienes en 1995la aislaron de la cavidad oral de pacientes infectados por el VIH en Dublín, Irlanda. Fue allí que se observó que en ciertos aislamientos, tipificados en principio como C. albicans, producían tubos germinales y clamidoconidios, pero no hibridaban de manera eficiente con la sonda de ADN 27 A específica para C. albicans. Esto reveló, que siendo especies diferentes, C. dubliniensis y C. albicans comparten características fenotípicas, lo que dificulta su diferenciación. Si se tiene en cuenta esta relación tan cercana entre ambas levaduras, la diferenciación de estas especies basada sólo en sus características fenotípicas puede ser complicada. Para resolver este problema, se han desarrollado actualmente, diversas técnicas basadas sólo en los aspectos fenotípicos de las levaduras, que conforman una marcha diagnóstica de fácil aplicación en el laboratorio de diagnóstico clínico micológico. Con el objetivo de aislar e identificar fenotípicamente Candida dubliniensis, como agente causal de candidiasis orofaríngea en pacientes inmunocomprometidos, en el Hospital Nacional de Clínicas de Córdoba (HNCCba). Materiales y métodos: se realizó un estudio observacional, descriptivo, en 145 pacientes provenientes de cinco servicios del HNCba, durante el período comprendido entre el 1º de julio de 2013 y el 31 de octubre de 2014, para investigar C. dubliniensis como agente causal de candidiasis oral, en los mismos. Con los siguientes criterios de inclusión: ≥18 años de edad, de ambos sexos, con manifestaciones clínicas de candidiasis oral, sin tratamiento con drogas ATF en el momento del estudio, ambulatorios e internados provenientes de los servicios de Infectología, Dermatología y Reumatología, Oncología, UTI-UCO e internados sin cuidados especiales, en distintas salas del HNCba, aceptar participar del estudio y firmar el consentimiento informado. Las muestras se obtuvieron mediante hisopado bucal; se realizaron examen microscópico directo en fresco y cultivos en ASG y lactrimel. Con las muestras positivas se realizó siembra en medio cromogénico (CHROMagar Candida®). A partir de las colonias que produjeron color verde en estemedio cromogénico se realizaron una serie de pruebas fenotípicas para identificar C. dubliniensis y diferenciarla de C. albicans, según el algoritmo propuesto en este estudio. Los datos se consignaron en una ficha diseñada para este fin y se analizaron mediante métodos categóricos presentados en forma de gráficos o tablas. Se estableció como nivel de significación estadística una p 0,05 para correlaciones del test T para muestras relacionadas. Resultados: de 127 pacientes con candidiasis oral, confirmados clínica y micológicamente, se aislaron 9 (6%) cepas de Candida dubliniensis; con predominio en los grupos de pacientes VIH/sida y con enfermedades autoinmunes (44% respectivamente), con candidiasis oral a repetición (78%) y forma clínica seudomembranosa principalmente (45%). La levadura más aislada en este estudio fue Candida albicans 78 (52%) seguida por C. tropicalis 20 (13,3%) y C. glabrata 13 (8,7%). Hubo aislamientos únicos (83%) y asociados (17%).Es de destacar un único triple aislamiento asociado de Candida dubliniensis, con C. glabrata y C. krusei. Con respecto a los aislamientos de C. dubliniensis según sexo, el 55% correspondió al sexo femenino y el promedio de edad fue menor en este grupo de pacientes, respecto de los que tuvieron otros aislamientos (49,88 vs. 63,22 años). La identificación de la levadura C. dubliniensis se realizó con el algoritmo propuesto en este trabajo, a partir del desarrollo de colonias verdes en CHOMagar Candida. Conclusiones: con la marcha fenotípica propuesta en este trabajo, en 127 pacientes con candidiasis oral confirmada clínica y microbiológicamente, se obtuvieron 150 aislamientos entre los cuales hubo 9 (6%) especies de C. dubliniensis. También se identificaron 78 (52%) cepas de C. albicans, 61 (41%) como otras especies Candida y 2 (1%) como levaduras no Candida. Del total de aislamientos el 17% fueron asociados, lo cual es frecuente en la mucosa oral; la asociación más frecuente correspondió a C. albicans-C. glabrata. C. dubliniensis, se aísla frecuentemente de cultivos mixtos y en este trabajo se la aisló conjuntamente con las especies C. krusei y C. glabrata. C. dubliniensis fue aislada principalmente en los grupos de pacientes VIH/sida y con enfermedades autoinmunes, lo cual constituye un hallazgo de importancia dentro de la población en estudio, por el alto impacto epidemiológico en nuestro hospital. La mayoría de los aislamientos de C. dubliniensis correspondió a pacientes con candidiasis oral a repeticióny los que presentaban la forma clínica seudomembranosa; la edad promedio fue significativamente menor con respecto a los otros aislamientos, seguramente porque los pacientes más afectados fueron los que presentaron VIH/sida y enfermedades autoinmunes, en su mayoría jóvenes y adultos jóvenes. Recomendamos para diferenciar C. dubliniensis de C. albicans, con quien comparte numerosas características fenotípicas, el algoritmo aquí propuesto, utilizando al menos cuatro de las pruebas de la marcha fenotípica, para aislar e identificar correctamente C. dubliniensis, en el laboratorio de Micología Clínica.