Uso de distintos desinfectantes superficiales para el establecimiento in vitro de segmentos nodales de Grevillea robusta

Abstract

La contaminación microbiana es un problema constante que compromete el desarrollo de todas la técnicas in vitro. Las pérdidas causadas por microorganismos contaminantes principalmente hongos y bacterias constituyen un serio problema a escala mundial en los numerosos laboratorios. Por ello para determinar un protocolo de desinfección de segmentos nodales de Grevillea robusta provenientes de brotes recolectados de plantas mantenidas en invernadero, se ensayaron diferentes soluciones de desinfectante (hipoclorito de sodio, peroxosulfato acido de potasio, peróxido de hidrogeno, y dos fungicidas, oxicloruro de cobre y carbendazim), en distintas concentraciones (de 0,5 a 10 g. L-1) y tiempos de exposición (15, 30 o 60 minutos). Los explantes fueron cultivados en un medio basal de Murasghige y Skoog. A los 28 días de cultivo, se determinó porcentaje de contaminación, oxidación y supervivencia/establecimiento de los explantes. Si bien todos los tratamientos ensayados han permitido el establecimiento de los cultivos entre un 36,67± 5,77 y un 90,00±10 %; los mejores resultados se obtuvieron con un pre- tratamiento de NaClO 0,25 g. L-1 y Carbendazim 0,75 g. L-1 por 15 minutos recomendándolo para un establecimiento exitoso, con un porcentaje de contaminación mínimo y un efecto fitotóxico en cuanto a ennegrecimiento u oxidación de los tejidos, dentro de los parámetros razonables.

Microbial contamination is a constant problem, which often compromises development of all in vitro techniques. The losses caused by contaminating micr oor ganisms, mainly fungi and bacteria, are a serious worldwide problem in numerous laboratories. There by , to determine a protocol for the disinfection of nodal segments of Grevillea robusta from sprouts collected from green house plants, differente disinfectant solutions were tried (sodium hypochlorite; potassium hydr ogen persulfate; hydr ogen per oxide; and two fungicides, copper oxychloride and carbendazim), using differ ent concentrations (between 0.5 and 10 g. L-1) and times of exposur e (15, 30, and 60 minutes). The explants wer e cultivated in a basal medium of Murasghige and Skoog. At 28 days of cultur e, the per centages of contamination, oxidation and survival/establishment of all the explants wer e determined. Even though all tr eatments tested allowed establishment between 36.67± 5.77 and 90.00±10 %, the best r esults wer e obtained with a pr etr eatment using NaClO 0.25 g. L-1 and Carbendazim 0.75 g. L-1 for 15 minutes. Thus, this pre-treatment is recommended for a successful establishment, with a minimum percentage of contamination, and phytotoxic effects of blackening or tissue oxidation within reasonable parameters.